攪拌式多肽合成儀是一種基于固相多肽合成法(SPPS)的自動化設備,通過程序控制實現氨基酸的逐個偶聯、脫保護、洗滌等步驟,最終合成目標多肽鏈。
攪拌式多肽合成儀操作流程:
準備階段:
環境要求:選擇干燥、清潔、溫度穩定的場所(20℃±5℃),避免潮濕、高溫或灰塵干擾。
設備檢查:確保儀器安裝平穩,電源電壓、頻率與設備要求匹配(如壓縮空氣壓力“AIR”表需60-100psi,“N?”表需5-10psi)。檢查溶劑儲液瓶、氣體管道連接是否緊密,防止泄漏。
試劑準備:準備高純度氨基酸、活化試劑(如HBTU)、溶劑(DMF、DCM)及樹脂,確保無雜質。根據合成方案稱量試劑,嚴格按比例混合(如3倍過量氨基酸用于偶聯反應)。
樹脂處理:將樹脂加入反應器,用DCM溶脹后抽干,再用DMF洗滌去除雜質。
合成階段:
輸入序列與參數:輸入多肽序列,設定反應條件(溫度、時間、溶劑比例)。示例:Fmoc脫保護(20%哌啶/DMF,5分鐘×2次);偶聯反應(3倍過量氨基酸,1小時)。
啟動程序:運行設備自檢程序,校準溫度、壓力、取液針等參數,確保傳感器精度。打開合成儀電源及壓縮空氣開關,啟動預設程序。
自動合成:儀器自動完成脫保護、偶聯、洗滌循環,全程監測反應溫度、壓力及pH值。
后處理階段:
裂解:加入裂解液(如TFA/水/三異丙基硅烷=95:2.5:2.5),室溫攪拌2小時,將多肽從樹脂上裂解下來。
純化:過濾除去樹脂,濃縮裂解液后用乙*沉淀粗肽,通過離心、洗滌得到固體產物。使用HPLC純化,去除雜質。